如圖2中所示，在將過濾器30(將所關注之顆粒收集在其薄膜28上)置於過濾器固持器組件14上之後，使第二定位構件32圍繞第一鉸鏈18旋轉至第二位置，以使玻片56到達接近薄膜28之位置。 因為玻片固持器33及玻片56之大部份重量離第一鉸鏈18最遠且插銷38離第一鉸鏈18較近，所以重力將使離第一鉸鏈18最遠之玻片固持器33之一側落下並使玻片固持器33之另一側升起。 因為樞軸銷38a比頂舉銷 38b更靠近第一鉸鏈18，所以其等比頂舉銷38b上升更多，從而將玻片56依稍偏離水平面之斜角方向置於薄膜28之外緣40下以用於初始接觸。 過濾器固持器組件14在與該玻片固持器組件相隔之位置附接至手柄12之延伸部份62。 參考圖1及5，該過濾器固持器組件14包含開放式中心軸42，通過該開放式中心軸可對薄膜28施加真空。
- 該玻片固持器組件在與該過濾器固持器組件相隔之位置附接至該手柄之延伸部份，且包括複數個樞軸連接(例如經鉸鏈連接)之定位構件及可移動連接至該等定位構件中相對於該延伸部份最遠之一者的玻片固持器。
- 將MCF-7 細胞分別以濃度：0、100、250μg/mL之抹草萃取物處理24小時，並於24小時時間點收集細胞裂解液。
- 第十九圖C係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內cyclin E/cdk2之表現。
- 頂舉銷38b與其槽孔36相互作用，以使玻片固持器33在其平面內的滑動降至最低程度。
- 性行為時的強力擠壓或激烈運動造成的乳房晃動都會刺激分泌物出現。
- 如請求項1之裝置，其中該過濾器固持器組件在與該把手部份自該延伸部份延伸之方向大約相同的方向上自該手柄之延伸部份延伸。
- 由第九圖之結果可知，相較於第一組或第三組來說，投予本發明所揭抹草萃取物之第二組裸鼠腫瘤組織內之Bax/Bcl-2、caspase3 及CAD 蛋白表現量皆明顯上升，分別較第一組增加約29％、19％及42％，顯示本發明所揭抹草萃取物能夠促進腫瘤細胞凋亡。
在一實施例中，玻片56係由玻璃製成且具有約一英寸之寬度、約三英寸之長度、及約0.04英寸之厚度。 亦可提供限定受關注顆粒之轉移區域的覆霜環，以利於手動或自動掃描稀少樣本。 該有界樣本區域具有約一平方英寸之面積，其實質上相當於薄膜28之表面積。
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第七圖係為分析各組裸鼠腫瘤組織中促凋亡蛋白（apoptotic body）表現量之結果。 第八圖係為檢測與細胞週期分子相關蛋白之表現及將之進行統計分析之結果。 第九圖係為檢測與細胞凋亡相關蛋白之表現及將之進行統計分析之結果。 第十圖係為分析經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚，其致死率及心跳變異率之結果。 第十一圖係為以解剖顯微鏡可觀察經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚，計算其血管分支數量之結果。 乳頭分泌物 第十二圖係為統計分析經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚之血管分支數量的結果。
剛停餵母乳沒多久（兩至三年以內）的女性也還會存有一些乳房分泌物，若量太多、或容易造成乳房痛或發炎，就要就醫檢查。 乳汁不是僅在產後出現，其實懷孕二十幾周時就可能出現乳汁，所以在孕期若看見乳頭出現些微白白的分泌物，先不用太過緊張而急著跑醫院，於產檢追蹤時向醫師確認一下即可。 依據申請專利範圍第1或2項所述用途，其中，該抹草萃取物係取一抹草以水作為萃取溶劑，並於高溫下進行萃取後，將所得濾液進行乾燥而得者。 其中，飼料是購於雍立貿易公司之#5058 老鼠專用飼料，將飼料磨成粉與本發明所揭抹草萃取物或藥物Tamoxifen 乳頭分泌物 混均勻，加入飲水搓成團塊餵食。 其中，總多酚含量之測定係採Folin-Ciocalteu定量分析法，總黃酮含量之測定係採Jia定量分析法，而上述定量分析方法為本發明所屬技術領域且具通常知識者所所周知的分析方法，故於此不加以贅述。 更進一步來說，該抹草萃取物係取一抹草以水作為萃取溶劑，並於高溫下進行萃取後，將所得濾液進行乾燥而得者，其中，萃取溫度以約100℃為佳。
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2.輕觸摸：要輕捏乳頭，看看是否有異常分泌物，尤其是自發性分泌物，指的是不需要持續刺激，很容易流出來。 其實最令人擔心的狀況就是乳頭出血，乳管內乳突瘤是乳頭出血最常見的原因，幸好大部分的乳管內乳突瘤是良性而且單一發生的，但是仍有少數的病人是因為乳癌造成的乳暈出血。 至於乳突瘤、乳癌、乳腺炎等問題，常是造成單側、單孔、量多、血色或黃綠色的異常分泌物。
- 第二十一圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞內Bax、Bcl-2之表現及表現量。
- 如請求項1之裝置，其中該等定位構件係經組態以使該玻片固持器自該過濾器固持器組件旋離，以利於自該過濾器固持器組件移除過濾器或將過濾器連接至其上。
- 第八圖係為檢測與細胞週期分子相關蛋白之表現及將之進行統計分析之結果。
- 因為收集用於分析之細胞樣本通常比傳統的外科病理學步驟(如活組織檢查)創傷性小，所以廣泛地使用細胞技術，藉此使用具有彈簧負載型可轉移探針、固定套管及類似物之專用活組織檢查用針，自患者切除組織樣本。
- 因此，自含有諸多細胞之流體樣品製備樣本通常需要首先藉由機械分散、流體剪切、或其他技術將細胞各自分離，以可收集薄單層細胞並沉積於玻片上。
- 如圖2中所示，在將過濾器30(將所關注之顆粒收集在其薄膜28上)置於過濾器固持器組件14上之後，使第二定位構件32圍繞第一鉸鏈18旋轉至第二位置，以使玻片56到達接近薄膜28之位置。
另外，乳頭若是有白色乳汁時，可能是泌乳激素過高或懷孕所因素造成，若分泌物是草綠色，大多和乳腺管過於擴張有關，也非一定是得了乳癌，唯有透過乳房攝影及超音波乳房檢查，才是王道。 婦女乳房篩檢門診中，常碰到因乳頭有分泌物而就醫的女性，醫師指出，造成乳頭出現分泌物原因很多，若是有乳頭流血，就要小心可能是乳癌前兆。 因此，提醒婦女自我篩檢乳癌，不只要自摸，還要「察顏觀色」，早期預防治療，降低乳癌發生風險。 之後，當使薄膜28自玻片56之表面撤回時，藉由逆轉翼片34上之壓力，發生逆轉步驟。
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在彼等實施例中，該過濾器固持器組件在與該玻片固持器組件相隔之位置連接至該手柄之延伸部份。 該玻片固持器組件係經組態以使該玻片固持器組件自圓柱體旋離，以利於使用該圓柱體。 而由第十八圖B之結果可知，抹草萃取物之濃度對於p16 蛋白表現並無顯著差異，顯示主要路徑並非透過抑制G0/G1之前期。 由上述結果可知，抹草萃取物造成MCF-7 細胞週期G0/G1 後期停滯作用。 可自諸如鋁之金屬及諸如聚甲醛(Delrin)之聚合物機械加工樣本玻片製備裝置10之各種部件(例如，第一定位構件22、第二定位構件32、玻片固持器組件16等)。
更進一步來說，於抹草萃取物濃度為250 或500 μg/mL，於24或48小時之細胞生長曲線街不再生長。 如同前述實例中所述，將MCF-7 細胞經由不同濃度之抹草萃取物處理24 小時後，以流式細胞儀分析各個細胞週期之分佈情形，並進行量化，結果如第十六圖所示。 如請求項21之裝置，其中該玻片固持器係藉由一或多個可旋轉連接構件連接至該手柄之延伸部份，該等構件係經組態以使該玻片固持器可自該圓柱體旋離，而利於使用該圓柱體。 如請求項24之裝置，其中該過濾器固持器組件另外包含一或多個密封構件，其係圍繞該圓柱體放置且經組態以在該過濾器與該圓柱體之間形成流體密封。 如請求項21之裝置，該過濾器固持器組件另外包含在該軸肩與該圓柱體之間圍繞該中心軸放置之彈簧，其中該彈簧在該圓柱體朝該軸肩移動時產生往復反向力。 如請求項16之裝置，該過濾器固持器組件另外包含置於該海綿容器內之海綿，其中該海綿係大於該容器且部份延伸至該開口外。
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一旦樣本經製備、固定及染色，則細胞技術家通常可在放大倍率下及具有或無各種照明源之情況下人工地目視檢 查該樣本。 例如，自動化視覺系統可對其上放置有樣本之整體玻片進行初步評估，以提醒細胞技術家該玻片之可能的最相關區域，從而用於仔細檢查；或可用於再篩選已經細胞技術家分析之樣本。 由第十六圖及第十七圖之結果證實，本發明所揭抹草萃取物具有誘發細胞週期於G0/G1 期停滯作用進而抑制腫瘤生長。 由第十六圖B之結果可知，相較於未以抹草萃取物處理之細胞來說，有以抹草萃取物處理之細胞於G0/G1 時期之數量係明顯上升；於抹草萃取物於濃度250 以及500 μg/mL時，則有明顯升高20%的G0/G1 期停滯（arrest）之表現。 由第十六圖C之結果可知，當抹草萃取物於濃度為250 以及500 μg/mL時，對於MCF-7 細胞之生長確實有明顯之抑制作用。
如請求項7之裝置，其中該過濾器固持器組件另外包含一或多個密封構件，其係圍繞該圓柱體放置且經組態以在該過濾器與該圓柱體之間形成流體密封。 如請求項5之裝置，該過濾器固持器組件另外包含置於該海綿容器內之海綿，其中該海綿係大於該容器且部份延伸至該開口外。 如請求項4之裝置，該過濾器固持器組件另外包含在該軸肩與該圓柱體之間圍繞該中心軸放置之彈簧，其中該彈簧在該圓柱體朝該軸肩移動時產生往復反向力。 如請求項1之裝置，其中該等定位構件係經組態以使該玻片固持器自該過濾器固持器組件旋離，以利於自該過濾器固持器組件移除過濾器或將過濾器連接至其上。 呈翼片34形式之致動構件係經附接至第二定位構件32，且用於將該第二定位構件32自如圖1中所示之第一位置手動旋轉至如圖2中所示之第二位置。
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某些用於在玻片上產生有利於目視檢查之薄單層細胞的方法及裝置係揭示於美國專利案第5,143,627、5,240,606、5,269,918、5,282,978、6,572,824、6,562,299及7,579,190號中。 依據申請專利範圍第1或2項所述用途，其中，該抹草萃取物係能夠抑制下列至少一蛋白表現：cyclinD1、cyclinE、E2F、cdk2、cdk4、p-Rb/Rb、Bcl-2。 乳頭分泌物 將MCF-7 細胞分別以濃度：0、100、250μg/mL之抹草萃取物處理24小時，並於24小時時間點收集細胞裂解液。
由第二十圖A之結果可知，隨著抹草萃取物處理濃度上升，MCF-7 細胞呈現進入早期和晚期細胞凋亡階段皆有明顯增加之情形，並由第二十圖B之統計分析結果得知細胞凋亡之比率明顯增加。 由此結果顯示，本發明所揭抹草萃取物於濃度為10~250 μg/mL時，會誘導乳癌細胞產生凋亡作用，進而達到治療乳癌之功效。 由上述結果可知，本發明所揭抹草萃取物係具有調控活體內腫瘤細胞生長週期停滯相關分子表現，以抑制腫瘤增生，進而達到治療癌症之功效。 在步驟114中，鬆開閂鎖58且藉由對翼片34手工施加壓力，使第二定位構件32自第一位置旋轉至第二位置，以使 玻片56與薄膜28之外緣40進行有限的初始接觸。 在步驟116中，藉由對翼片34手工施加壓力使第二定位構件32自第二位置旋轉至第三位置。 此施加至翼片34之額外壓力亦使玻片固持器33自第一位置旋轉至第二位置，由此使薄膜28滾動通過玻片56，以實現玻片56與薄膜28之間的完全接觸。
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可藉由經程式化以使用已知法則自動收集該單層之微處理器來控制步驟110。 在步驟112中，自該樣品小瓶移出過濾器30之薄膜28，然後再封蓋。 在一該實施例中，過濾器固持器組件較佳在與該把手部份自該延伸部份延伸之方向大約相同的方向上自該手柄之延伸部份延伸。 在一該實施例中，該過濾器固持器組件之中心軸具有相對於該延伸部份之近端及遠端，且包括在近端處之軸肩及在遠端處之海綿容器。 該過濾器固持器組件亦包括在該軸肩與圓柱體之間且圍繞該中心軸放置的彈簧，其中該彈簧在該圓柱體移向該軸肩時產生往復反向力。 該過濾器固持器組件亦包含置於該海綿容器內之海綿，其係大於該容器且部份延伸至該開口外。
目前臨床上對於乳癌治療是以採取手術切除為主，再輔以化療、放療或荷爾蒙療法等，惟，大多數患者在半年之後會因癌細胞再度增生而使病情惡化，使得目前臨床上對於乳癌治療仍面臨無法降低復發率及死亡率之問題。 乳頭分泌物 雖然目前研究指出降低乳腺管細胞的增生作用被視為是有效預防及治療乳腺癌之方法，但是目前現有治療方法中仍未能提供有效降低乳腺管細胞的增生作用之物質。 國內臨床調查發現，乳頭流血的女性中約2成罹患乳癌，分泌淺黃色分泌物的女性也有1成罹患乳癌。 曾建仁醫師強調，如果是單側、自發性而無需擠壓、持續性的，而且來自單一乳管就要特別留心。
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此外，裝置10可用於自不同樣品(如婦產科細胞樣品，源自細針抽吸物、取自呼吸道及胃腸道之黏液樣本、諸如漿液性滲出液及尿液及腦脊髓液之體液、來自口腔、乳頭分泌物、皮膚損傷、及眼刷之表面刷取物及刮擦物、及其他來源之細胞)製備樣本。 使用上述專利案中所述之過濾器轉移裝置及方法，在薄膜28上收集顆粒。 可將過濾器轉移裝置之各種元件(如經程式化以將單層受關注顆粒自懸浮於流體中之樣本收集至過濾器30之薄膜28上的真空裝置及控制微處理器)作為樣本玻片製備裝置10之部份置於手柄12的內部。 可通過開放式中心軸42對薄膜28施加真空，且可將控制器置於手柄12上。
通常希望玻片上之該等細胞具有適當的空間分佈，以可 檢查個別細胞。 因此，自含有諸多細胞之流體樣品製備樣本通常需要首先藉由機械分散、流體剪切、或其他技術將細胞各自分離，以可收集薄單層細胞並沉積於玻片上。 當應用於實驗室環境中時，細胞學者、細胞技術家、及其他醫療專家根據患者細胞樣本的目視檢查對患者的病情進行醫學診斷。 典型的細胞技術係「子宮頸抹片檢查」測試，其中自女性子宮頸刮取細胞並進行分析，以檢測異常細胞(子宮頸癌出現之先兆)的存在。
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使用類似於指紋法中所使用之滾動，使玻片56與薄膜28的大部份之間逐漸輕輕地自小面積初始接觸轉變至完全接觸。 根據此等專利案中所揭示之一種方法，樣品容器中之含於防腐劑流體中的患者細胞係使用置於其中之旋轉式樣品收集器而分散。 將控制真空施加至該樣品收集器，以通過其篩網過濾器抽吸流體，直至緊靠該過濾器收集到所需數量及空間分佈之細胞。 此後，自該樣品容器移出該樣品收集器，並將過濾器部份按壓在載玻片上，以將所關注之顆粒以實質上與收集時相同之空間分佈轉移至該玻片上。
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此外，如圖1所示，將閂鎖58置於第一定位構件22上，以將第二定位構件32固定於第一位置。 因為收集用於分析之細胞樣本通常比傳統的外科病理學步驟(如活組織檢查)創傷性小，所以廣泛地使用細胞技術，藉此使用具有彈簧負載型可轉移探針、固定套管及類似物之專用活組織檢查用針，自患者切除組織樣本。 可藉由各種技術自患者獲得細胞樣本，包括(例如)藉由刮擦或擦拭某區域，或藉由使用針自胸腔、膀胱、椎管、或其他適當的區域吸出體液。 將該等細胞樣本置於溶液中，隨後收集並轉移至載玻片上，以在放大倍率下觀察。 可在該載玻片上之細胞上塗覆固定劑及染色溶液，以為存檔目的及便於檢查而保存樣本。 更進一步來說，綜合第十圖至第十二圖之結果可知，本發明所揭抹草萃取物於濃度200 g/mL或以下時，如200 g/mL、100 g/mL，同時具有最低致死率及較佳抑制血管新生之功效。
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第十八圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內p-p53/p53之表現及表現量。 第十八圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期蛋白依賴性激酶之表現及表現量。 第十八圖C係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期中週期素之表現及表現量。 第十八圖D係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期蛋白依賴性激酶抑制者之表現及表現量。 第十八圖E係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內E2F、p-Rb、Rb之表現及表現量。 第十九圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內Rb/E2F 複合體之表現。
由第二十一圖A及第二十一圖B之結果顯示，本發明所揭抹草萃取物能夠使乳癌細胞行經Bax/ Bcl-2 誘導凋亡路徑，進而活化caspase3 和CAD，使細胞產生凋亡現象，進而達到治療乳癌之功效。 由此結果推知，本發明所揭抹草萃取物係藉由增加p53 蛋白磷酸化、p21和p27之表現而抑制cyclinD1/cdk4 和cyclinE/cdk2 複合體之活化，以增強Rb/E2F 之結合能力，進而導致p-Rb 和游離E2F之表現受到抑制，促使細胞週期停滯。 由第十七圖之結果可知，隨著抹草萃取物之濃度增加，反應24小時後之細胞處於生長週期G0/G1期之數量增加越明顯（如第十七圖A），並且由第十七圖B可知，於反應24小時後，有明顯G0/G1期停滯的表現，於反應48小時後無明顯差異。 以不同濃度之抹草萃取物：0、100、250μg/mL處理MCF-7 細胞反應0、24和48 小時後，進一步以流式細胞儀分析抹草萃取物在不同時間點之細胞週期性變化，結果如第十七圖所示。 將受精16小時後的斑馬魚卵用Pronase 酵素液（2 mg/mL 溶於一次水）進行破殼，置於37℃溫箱反應4至8分鐘（每兩分鐘觀察一次），以一次水終止反應，製造水流使卵殼浮起並吸除，放回28℃培養箱24 小時後，隨機分為5 組。 分別加入不同濃度之本發明所揭抹草萃取物做處理，濃度分別為0、100、200、500、1000 μg/mL，放置於28℃恆溫培養箱中生長24小時後，再進行後續分析。
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用於製備細胞樣本的裝置 本發明係關於細胞樣本的製法，且更特定而言係關於自患者樣本製備細胞樣本及維持該患者樣本與該樣本之間的一對一相互關係的人工方法及裝置。 由第十九圖A至第十九圖D可知，隨著抹草萃取物濃度上升至250μg/mL，可促使MCF-7 細胞中Rb/E2F 複合體 表現量增加24%、cyclin D1/cdk4 以及cyclin E/cdk2 之結合表現則分別下降26%以及32%。 由第十一圖及第十二圖之結果可知，與濃度為0 g/mL之抹草萃取物相比，血管分支數目隨著抹草萃取物濃度之增加而減少。 具體來說，相較於濃度為0 g/mL之抹草萃取物，當抹草萃取物濃度為100 乳頭分泌物 g/mL，血管新生數量下降43%，而當抹草萃取物濃度為200 g/mL，血管新生數量下降50％以上，而能夠有效抑制血管新生。
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施加至翼片34之其他額外壓力亦壓縮海綿54，以使薄膜28凸起並有利於受關注顆粒自薄膜28轉移至玻片56。 在步驟118中，自薄膜28移出玻片56，固定，並進行其他加工(如染色)。 在使用時，於圖6之步驟102中，將玻片56裝載至玻片固持器33內，且藉由閂鎖58將第二定位構件32鎖定於第一位置。 在步驟106中，視需要攪動樣品小瓶，以使懸浮於其中所包含之液體內的受關注顆粒分散。 在步驟108中，打開樣品小瓶之瓶蓋，且用手將過濾器30之薄膜28浸入流體中。 在步驟110中，通過薄膜28對該流體施加真空，以在該薄膜28上收集單層受關注顆粒。
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該等插銷38係插入槽孔36中，以使玻片固持器33樞軸附接至第二定位構件32。 槽孔36係稍大於插銷38，由此允許玻片固持器33相對於第二定位構件32進行某些移動。 當第二定位構件32旋轉至第二位置(圖2)時，外緣40及樞軸銷38a形成第二鉸鏈20(玻片固持器33圍繞其轉動)。 頂舉銷38b與其槽孔36相互作用，以使玻片固持器33在其平面內的滑動降至最低程度。 圖1顯示一手持式樣本玻片製備裝置10，其具有手柄12及與其連接之過濾器固持器組件14及玻片固持器組件16。 緊湊尺寸提供可攜帶性，且同時降低成本、複雜性並減少所需之實驗室操作台空間。
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2.一些跟乳房無關的情形：例如某些精神科用藥、抗憂鬱藥物、止吐藥或嗎啡類(美沙冬)的藥物、避孕藥、甲狀腺功能低下、性交時過度刺激乳頭，甚至精神壓力大等，都可能會引起淡白色乳汁狀的分泌物。 乳頭分泌物 1.乳房纖維囊腫：變化會有黃、棕、綠及灰色透明分泌物，乳暈後的主要乳管退化後鬆弛擴張，會蓄積一些油脂及細胞的廢棄物，乳暈會有像起司膏狀的東西。 假使分泌物的顏色為血色、太過透明、咖啡色、或黃綠色，通常是警訊！ 假使配合上量多，還僅在單邊、甚至單孔出現，最好要趕快就醫檢查。
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該等定位構件較佳係經組態以使該玻片固持器可自該過濾器固持器組件旋離，以利於自該過濾器固持器組件移除過濾器或將過濾器連接至其上。 在一示例性實施例中，該手柄具有把手部份及自該把手部份突出之延伸部份，其中該過濾器固持器組件及玻片固持器組件各自在相隔位置上連接至該手柄之延伸部份。 在該實施例中，該過濾器固持器組件在與該把手部份自該延伸部份延伸之方向大約相同的方向上自該手柄之延伸部份延伸。 第六圖係為分析各組裸鼠腫瘤組織中細胞增生蛋白PCNA表現量之結果。